جداسازی و بررسی مولکولی باکتری های تجزیه کننده سیانید از خاک

چکیده سیانید ترکیبی سمی و بسیار خطرناک برای موجودات زنده است که به طور گسترده توسط بشر تولید شده و موجب آلودگی محیط زیست می شود. بهترین روش برای حذف سیانید موجود در پساب صنایع، تجزیه زیستی است. جداسازی باکتری های بومی تجزیه کننده سیانید از خاک آلوده و مطالعه توانایی آن ها در تجزیه سیانید، از اهداف این پژوهش بود. پس از جمع آوری نمونه های خاک، غنی سازی باکتری های تجزیه کننده سیانید در محیط کشت پایه حاوی 3/4 میلی مولار پتاسیم سیانید انجام شد. توانایی باکتری جدا شده در استفاده از سیانید به عنوان تنها منبع کربن و نیتروژن مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه سیانید و تولید آمونیاک در محیط کشت توسط روش پیکریک اسید و نسلر، سنجیده شد. برای بررسی سمیت ترکیبات مختلف سیانیدی بر رشد باکتری، از روش حداقل غلظت مهارکنندگی رشد استفاده شد. هم چنین توانایی باکتری جداشده در استفاده از ترکیبات مختلف سیانیدی، بررسی شد. شناسایی باکتری جدا شده به کمک بررسی مشخصات مورفولوژیکی، فیزیولوژیکی و نیز آنالیز مولکولی، انجام شد. از خاک آلوده معدن طلا، سه باکتری با توانایی تجزیه سیانید به عنوان تنها منبع کربن و نیتروژن، جداسازی شد. این باکتری ها با عنوان جدایه mf1، mf2 و mf3نامگذاری شد. تمامی این جدایه ها توانستند سیانید محیط رشد را در شرایط قلیایی، پس از 40 ساعت تجزیه کند. هم چنین این جدایه ها توانایی تحمل بیش از 5 میلی مولار سیانید پتاسیم را داشت. نتایج نشان داد که کاهش غلظت سیانید با افزایش غلظت آمونیاک در محیط رشد و نیز رشد جدایه ها، ارتباط مستقیم داشت. هم چنین باکتری جداشده، توانایی استفاده از ترکیبات مختلف سیانیدی به عنوان تنها منبع کربن و نیتروژن را نشان داد. نتایج بررسی مشخصات مرفولوژیکی و فیزیولوژیکی بررسی توالی ژن 16s rdna و رسم درخت فیلوژنی نیز نشان داد که جدایه mf1 دارای 99 درصد هومولوژی با سراشیا نماتودیفیلا (serratia nematodiphila)، جدایه mf2 دارای 99 درصد هومولوژی با اسینتوباکتر پی تی یی (acinetobacter pittii) و جدایه mf3 دارای 99 درصد هومولوژی با باسیلوس سفنسیس(bacillus safensis). است. نتایج نشان داد باکتری های جدا شده، گزینه مناسبی برای تجزیه زیستی سیانید در شرایط قلیایی است. این باکتری می تواند برای تجزیه سیانید از پساب صنایع و مکان های آلوده، معرفی شوند